男人用鸡鸡捅女人在线看,久久综合九色综合欧洲色,欧美日韩久久久久久久久,AV在线免费下载的网站

您好,歡迎光臨中科瑞泰!

免費咨詢電話:
400-699-0631

首頁 > 蛋白生物學(xué) > 蛋白提取純化 > 裂解液

RIPA裂解液(中)

RIPA裂解液(中)

產(chǎn)品編號:RL1030

產(chǎn)品規(guī)格:100ml

數(shù)量
價格 ¥200


RIPA裂解液()

產(chǎn)品包裝:

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品包裝

說明書

RL0130

RIPA裂解液()

100 ml

1

產(chǎn)品簡介:

RIPA裂解液(RIPA  Lysis  Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。RIPA的本意是Radio  Immunoprecipitation  Assay。RIPA裂解液的配方有很多種,根據(jù)其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。RIPA裂解液(中)的主要成分為Tris (pH 7.4), NaCl, 1% NP-40, 0.5% sodium deoxycholate, 0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多種抑制劑,可以有效抑制蛋白降解。用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

保存條件:

-20℃保存,一年有效。

注意事項:

1.為取得最佳的使用效果,盡量避免過多的反復(fù)凍融??梢赃m當(dāng)分裝后使用。需自備PMSF。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

2. RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測與基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗;如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,例如NF-kappaB、p53等時,通常不必進(jìn)行超聲處理,就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

使用說明:

1.  準(zhǔn)備RIPA裂解液:

融解RIPA裂解液,混勻;取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入1/100體積的100 mM PMSF,使PMSF的最終濃度為1 mM。

2. 細(xì)胞蛋白提?。?/span>

2.1 貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,加入適量1×PBS,輕柔漂洗一遍,不要擾動貼壁細(xì)胞。按照6孔板每孔加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液,移液器吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸,冰上裂解細(xì)胞5分鐘,用細(xì)胞刮刀刮下細(xì)胞收集于1.5 ml離心管中,冰上繼續(xù)裂解15分鐘,間歇混勻。

培養(yǎng)板規(guī)格/培養(yǎng)皿表面積

細(xì)胞量

RIPA推薦使用量

100 mm培養(yǎng)皿

1.5×107

0.5-1 ml

60 mm培養(yǎng)皿

5×106

0.25-0.5 ml

35 mm培養(yǎng)皿

2×106

0.2-0.4 ml

6孔板

2.5×106

100-200 μl

24孔板

5×105

100-150 μl

96孔板

1×105

50-100 μl

2.2 懸浮細(xì)胞:450 g 4℃ 離心5 min收集細(xì)胞;用適量1×PBS重懸細(xì)胞,450 g 4℃ 離心5 min收集細(xì)胞;重復(fù)漂洗細(xì)胞一次;按照細(xì)胞沉淀體積(PCV)20 μl加入200 μl RIPA的比例加入RIPA,混勻細(xì)胞沉淀,冰浴處理15分鐘,間歇混勻。

注:2×106 Jurkat細(xì)胞,其細(xì)胞沉淀體積(PCV,Packed Cell Volume)大約為20 μl。

2.3 裂解細(xì)胞:

裂解混合物超聲波處理(超聲條件根據(jù)儀器調(diào)整,建議條件為);如沒有超聲破碎儀,可以使用注射器用27G針頭處理裂解物10-15次(貨號:PE2719 ,蛋白提取針頭套裝),以徹底裂解細(xì)胞。冰浴處理15分鐘。

注:裂解中細(xì)胞會釋放出變性的核酸,呈團(tuán)狀粘稠透明樣,如不進(jìn)行超聲或針頭裂解處理,會導(dǎo)致裂解物非常粘稠,大大降低蛋白提取的得率和純度。

2.4 離心收集上清:

充分裂解后,4℃ 16000 g離心10分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

3. 組織樣品蛋白提?。?/span>

3.1 手術(shù)切除的組織塊迅速置于預(yù)冷的生理鹽水中,漂洗數(shù)次,洗凈組織血跡,用濾紙吸

干組織表面液體,將組織切成細(xì)小的碎片。

3.2 按照每20 mg組織加入200 μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

3.3 用玻璃勻漿器冰浴勻漿5-10次,收集勻漿后的裂解混合物,超聲波處理(超聲條件根據(jù)儀器調(diào)整,建議條件為);如沒有超聲破碎儀,可以使用注射器用27G針頭處理裂解物10-15次(貨號:PE2719 ,蛋白提取針頭套裝),以徹底裂解細(xì)胞。裂解物冰浴處理15分鐘。

注:裂解中細(xì)胞會釋放出變性的核酸,呈團(tuán)狀粘稠透明樣,如不進(jìn)行超聲或針頭裂解處理,會導(dǎo)致裂解物非常粘稠,大大降低蛋白提取的得率和純度。

3.4 充分裂解后,4℃ 16000 g離心10分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。


實驗示例:

Jurkat RIPA總蛋白提取,GAPDH檢測

總蛋白提?。?×106 Jurkat細(xì)胞,450 g 離心收集,去上清,PBS漂洗兩次,沉淀中加入200 μl RIPA(加2 μl 100 mM PMSF),冰上裂解5分鐘,4℃ 16000 g 15 分鐘,上清即為總蛋白(TP)。

電泳:RTD6132-15%3.3C  200 V 33-12 mA 55 min

轉(zhuǎn)膜:NC膜,1×RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液濕轉(zhuǎn),穩(wěn)流400 mA,電壓變化64-57 V,轉(zhuǎn)膜時間35 min

封閉:無蛋白快速封閉液,RT 20 min

一抗孵育:GAPDH 羊抗兔多抗,一抗稀釋液稀釋1:2000

二抗孵育:羊抗兔IgG-HRP,二抗稀釋液稀釋1:5000

檢測:ECL發(fā)光檢測




 
只有購買過該商品的用戶才能進(jìn)行評價。[發(fā)表評價]
香蕉久久久久人妻精品一区| 久久久精品韩国欧美久久| 久久享收视频| 欧美一区二区三区视视频| 久久久久一区二区三区国产| 国产精品久久久久久久人妻| 亚洲成a人在线观看中文| 老鸭窝一区二区三区四区| 国产精品交换| 日韩欧美在线观看网址导航| 96亚洲精品久久久蜜桃| 久久了免费视品在现观看| 丁香婷婷婷中文字幕在线| 日本久久久久| 大鸡吧视频免费在线观看| 亚洲国产精品久久精品成人| 国产精品拍天天在线强奸| 国产一区二区三区精品片| 久久熟妇人妻午夜寂寞影院| 九九九精品国产一区二区| 日本高清一区二区三区视频| 灯草和尚在线观看| 亚洲 欧美 日韩 成人| 精品国产av一区二区三| 欧美日韩亚洲一区二区超碰| 狠狠人妻久久久久久综合| 亚洲av成人av在线观看| 亚洲男人的天堂久久香蕉| 久久久久综合网久久久久| AV中文字幕无码免费看| 亚洲老头老太性hd农村| 亚洲丁香五月天| 综合一区中文字幕欧美日韩| 日本一区二区三区精品不卡| 国产台湾黄色av一区二区| 久久午夜无码鲁丝片秋霞| 天天躁夜夜躁狠狠躁夜夜| 国产成人拍精品免费视频| 嫩逼插进大鸡巴视频无码| 亚洲美女亚洲精品久久久久| 国产精品99爱免费视频|