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10×RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液

10×RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液

產(chǎn)品編號:RT5020

產(chǎn)品規(guī)格:500ml

數(shù)量
價(jià)格 ¥200

10×RealBlot 快速轉(zhuǎn)膜液


                 10×RealBlot Rapid Transfer buffer            

產(chǎn)品組成:

貨號

名稱

規(guī)格

保存條件

RT5020

10×RealBlo快速轉(zhuǎn)膜液

500 ml

4

說明書

一份

產(chǎn)品簡介:

快速轉(zhuǎn)膜液使用獨(dú)特配方,能高效快速地將蛋白轉(zhuǎn)移到印跡膜(PVDF或硝纖膜)上。使用濕轉(zhuǎn)法(Tank blot)或半干轉(zhuǎn)法(Semi-dry blot)方法,能在10-40分鐘內(nèi)完成轉(zhuǎn)膜過程。

快速和環(huán)保:快速轉(zhuǎn)膜液不使用甲醇,減輕了對實(shí)驗(yàn)者和環(huán)境的傷害。

兼容性好:快速轉(zhuǎn)膜液能兼容Laemmli膠,預(yù)制膠,Bis-Tris膠等多種凝膠。

轉(zhuǎn)移效率高:快速轉(zhuǎn)膜液對分子量跨度較大的蛋白也有很好的轉(zhuǎn)移效率,有效解決了大小蛋白不能在同一張膜上同時(shí)轉(zhuǎn)移的問題。

貯存及運(yùn)輸:

  4-8貯存,有效期一年;常溫運(yùn)輸。

使用說明:

轉(zhuǎn)膜前的準(zhǔn)備:

6-10張裁好的普通濾紙或Whatman3MM濾紙;裁好的轉(zhuǎn)印膜;足夠的1×快速轉(zhuǎn)移buffer;無水甲醇(處理PVDF膜用)

濕轉(zhuǎn)法(Tank blot):

1 按照下表配制1×快速轉(zhuǎn)膜液

1×快速轉(zhuǎn)膜液配制量  1000ml

10×快速轉(zhuǎn)膜液

100 ml

無水乙醇

200 ml

超純水

700 ml

2 將濾紙和海綿浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中,完全浸濕,平衡5分鐘。

3 PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30,隨后浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中,完全浸濕,平衡5分鐘;NC膜無需處理,直接浸泡在轉(zhuǎn)膜緩沖液中。

4 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘,去除膠表面的SDS;隨后將凝膠浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中。

注意:水中漂洗時(shí)間一定不能超過2分鐘,否則分子量較大的蛋白不能完全轉(zhuǎn)移。

5 按照以下順序做好轉(zhuǎn)印三明治結(jié)構(gòu):

1 負(fù)極(陰極)

2 一塊海綿

3 濾紙(3張)

4 凝膠

5 轉(zhuǎn)印膜

6濾紙(3張)

7 一塊海綿(根據(jù)三明治的厚度選擇是否使用)

8 正極(陽極)

注意:   要徹底清除三明治結(jié)構(gòu)中的氣泡,適當(dāng)補(bǔ)加1×快速轉(zhuǎn)膜液保持三明治結(jié)構(gòu)濕潤。

  三明治結(jié)構(gòu)的制作不能太緊,也不能太松。太緊和太松都會影響轉(zhuǎn)印效果。如果太緊的話,可以去除陽極一側(cè)的海綿。

6 將三明治結(jié)構(gòu)放于轉(zhuǎn)移槽中,轉(zhuǎn)印槽中灌滿1×快速轉(zhuǎn)膜液。

7 濕轉(zhuǎn)推薦使用恒流轉(zhuǎn)移:

電流

轉(zhuǎn)移時(shí)間

電壓變化

300 mA

30 to 35 min

50-55 V

350 mA

25 to 30 min

55-58 V

375 mA

20 to 25 min

58-62 V

400 mA

15 to 20 min

58-65 V




半干轉(zhuǎn)(Semi-dry blot):

1 按照下表配制1×快速轉(zhuǎn)膜液:

1×快速轉(zhuǎn)膜液配制量  500ml

10×快速轉(zhuǎn)膜液

50 ml

無水乙醇

100 ml

超純水

350 ml

2 將濾紙浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中,完全浸濕。

3 PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30,浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中,完全浸濕,平衡5分鐘。NC膜無需處理,直接浸泡在轉(zhuǎn)膜緩沖液中。

4 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘,去除膠表面的SDS;隨后將凝膠浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中。

注意:水中漂洗時(shí)間不能超過2分鐘,否則分子量較大的蛋白可能不能完全轉(zhuǎn)移。

5 按照以下順序做好轉(zhuǎn)印三明治結(jié)構(gòu):

1 負(fù)極(陰極)

2 下層濾紙(5張)

3 凝膠

4 轉(zhuǎn)印膜

5 上層濾紙(5張)

6 正極(陽極)

半干轉(zhuǎn)時(shí),濾紙、膠、膜之間的大小,一般是下層濾紙>=>=>=上層濾紙。上下兩層的濾紙一定不能接觸;濾紙、膠、膜之間千萬不能有氣泡,接觸的濾紙和氣泡會造成短路。

6 半干轉(zhuǎn)推薦使用恒流轉(zhuǎn)移:

恒電流

轉(zhuǎn)移時(shí)間

電壓變化

400 mA

25-30min

9-13 V

注:不同廠家半干轉(zhuǎn)儀器設(shè)置可能有所不同,請根據(jù)廠家說明書適當(dāng)調(diào)整。

問題解決:

問題

可能原因

解決方法

轉(zhuǎn)膜不充分

濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移槽鉑金絲有鹽沉積

徹底用超純水清洗轉(zhuǎn)移槽

轉(zhuǎn)移膜,濾紙,凝膠沒有在1×轉(zhuǎn)移緩沖液中徹底平衡

轉(zhuǎn)移膜,濾紙,凝膠要在1×快速轉(zhuǎn)膜液中平衡5分鐘,震蕩平衡更好

PVDF膜沒有用甲醇預(yù)處理

PVDF膜要用甲醇徹底潤濕,然后在1×快速轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡5分鐘

轉(zhuǎn)膜時(shí)間不充分

適當(dāng)延長轉(zhuǎn)膜時(shí)間

不連續(xù)的轉(zhuǎn)膜

凝膠和膜之間有氣泡

轉(zhuǎn)膜三明治做好后,用滾軸把凝膠和膜之間的氣泡趕走

PVDF膜沒有用甲醇預(yù)處理

PVDF膜要用甲醇潤濕,然后在1×快速轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡5分鐘

轉(zhuǎn)膜設(shè)備不工作

電泳電源不配套

電泳電源要符合以下參數(shù):300W,5-300V,0.01-3A

 




 實(shí)驗(yàn)示例:







 
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