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Aureobasidin A 金擔子素A/金黃擔子素A

Aureobasidin A 金擔子素A/金黃擔子素A

產(chǎn)品編號:AU0113S-01

產(chǎn)品規(guī)格:1ml

相關(guān)規(guī)格:
數(shù)量
價格 ¥700

Aureobasidin A Solution

金擔子素A溶液 1mg/ml

 

產(chǎn)品包裝:

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品包裝

說明書

AU0113S-01

金擔子素A溶液(1mg/ml)

1ml

1

AU0113S-02

金擔子素A溶液(1mg/ml)

5×1ml

1

AU0113S-03

金擔子素A溶液(1mg/ml)

10×1ml

1

貯存、運輸及效期:

-20℃貯存;濕冰運輸;有效期一年。

產(chǎn)品參數(shù):

外觀:  無色清晰甲醇溶液。

除菌方式:過濾除菌。

濃度:1mg/ml 甲醇溶液。

產(chǎn)品介紹:

一、關(guān)于AbA

金擔子素A(Aureobasidin A,AbA)是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環(huán)酯肽類抗生素,具有很強的抗真菌能力。AbA作用機制是抑制酵母中AUR1基因編碼的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干擾鞘脂合成,從而殺死菌株。AbA在較低的濃度下(0.1-0.5 μg/ml)即可對酵母產(chǎn)生毒性。編碼IPC合成酶的基因研究較多的來自釀酒酵母菌的AUR1基因,以及構(gòu)巢曲霉的AURA基因,兩者具有同源性。通過對編碼AUR1-C基因進行突變即可使得菌株對AbA產(chǎn)生抗性,作為蛋白質(zhì)互作研究的報告基因。

因為AbA可以直接殺死敏感的酵母菌株,而不是延遲菌株生長,所以AbA篩選有利于陽性克隆的生長和識別。與營養(yǎng)報告基因(如HIS3)進行低嚴緊度初篩相比,AbA篩選大大消除了背景克隆。實際操作中,用AbA進行初篩時會獲得更多克隆,之后再用4個報告子(AUR1-C,HIS3, ADE2 和MEL1)進行高嚴緊度的二次篩選以驗證陽性克隆。AbA非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標記;也是酵母單/雙雜交研究中理想的報告子,可以簡化酵母雙雜交文庫篩選。

二、使用方法:

1.本品為AbA的甲醇溶液,濃度為1 mg/ml,直接用作儲存液。

2.滅菌后YPD Agar培養(yǎng)基冷卻至50-55 ℃,加入適量的AbA儲液,倒板備用。(AbA工作濃度取決于宿主細胞的敏感度,見下表)

3.制備酵母感受態(tài)細胞并完成轉(zhuǎn)化。

4.把100 μl完成轉(zhuǎn)化酵母細胞懸液涂到含有適量AbA的YPD Agar培養(yǎng)基平板上,30℃培養(yǎng)2-4天。

5.挑取克隆鑒定,或統(tǒng)計轉(zhuǎn)化效率。

三、不同菌株建議AbA的工作濃度:

菌株

MICμg/ml

S.cerevisiae

ATCC9763diploid

0.2-0.4

Baker’s yeastdiploid

0.2-0.4

Beer yeasttriploid or tetraploid

0.1

SH3328haploid

0.1

Shochu yeastdiploid

0.1

Sake yeastdiploid

0.1-0.2

C.albicans

TIMM-0136diploid

0.04

C.tropicalis

TIMM-0324diploid

0.08

Schizo.pombe

JY-745monoploid

0.1

四、對AbA敏感的真菌:

出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。


 
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